Rapid identification of Fonsecaea by duplex polymerase chain reaction in isolates from patients with chromoblastomycosis.

Fonsecaea pedrosoi is the most common etiologic agent of chromoblastomycosis. F. pedrosoi and other dematiaceous fungi are usually identified by morphologic studies. We have developed a duplex polymerase chain reaction (PCR) targeting the ribosomal DNA for rapid and more specific identification of the genus Fonsecaea. DNA samples from 103 isolates of Fonsecaea species and other dematiaceous fungi were amplified by PCR using universal and specific primers targeting ITS1-5.8S-ITS2 region of the ribosomal DNA. Universal primers were used for detection of non-Fonsecaea DNA. Fonsecaea-specific PCR product was found in 70 (68.0%) isolates including 4 strains that did not develop conidiogenesis. Thirty non-Fonsecaea and 3 Fonsecaea compacta isolates were negative by duplex PCR. These results were confirmed by DNA sequencing analysis indicating the high specificity of the duplex PCR assay. In conclusion, the duplex PCR is a rapid and specific assay for identification of Fonsecaea isolates mainly for the strains that are difficult to identify by morphologic methods.

Oropharyngeal candidiasis in HIV-infected patients under treatment with protease inhibitors.

OBJECTIVE: Oropharyngeal candidiasis decreased when protease inhibitors were included with other antiretrovirals to treat HIV infection. We tested oral yeast isolates of Brazilian HIV-infected individuals receiving antiretroviral therapy for protease secretion and susceptibility to ritonavir and some antifungals. STUDY DESIGN: We collected oral samples and identified yeasts from 19 HIV-infected patients receiving highly active antiretroviral therapy (HAART) and suspected of having oral candidiasis. Ritonavir and its excipients' effects on the isolated yeasts were tested for protease secretion by Rüchel's technique. The yeasts' susceptibility to amphotericin B (AnB), fluorocitosine (5FC), fluconazole (FZL), ketoconazole (KZL), and itraconazole (IZL) was determined by E-test (AB Biodisk). Chi-squared test determined the statistical differences. RESULTS: Twenty-five different positive isolates were obtained. Sixty-eight percent were C. albicans. Other isolates included C. famata (16%), C. glabrata (4%), C. tropicalis (4%), T. capitatum (4%), and 1 isolate not identified. High protease secretion was observed for most of the isolates (20/25). Ritonavir only altered enzyme secretion in 6/20 of the protease-secreting isolates. All isolates were highly sensitive to both AnB and 5FC. Antifungal activity did not change when ritonavir was added to the culture media. Some isolates were highly resistant to studied antifungals (52.2% KZL, 30.4% FZL, and 26% IZL). Resistance significantly decreased when ritonavir was added to the medium with KZL and IZL (P <.5 by chi-squared). A trend to decreased resistance was also observed with FZL but the results were not statistically significant. CONCLUSION: Candida continues to be the most prevalent fungus in the oral cavity. Although oral candidal isolates secrete protease, ritonavir does not inhibit all protease-secreting oral yeast isolates. There seems to be a synergistic effect between ritonavir and oral antifungals against fungal resistance.

Yeasts from the oral cavity of children with AIDS: exoenzyme production and antifungal resistance

The oral fungal microbiota of 30 children with AIDS, of both genders, aged from two to six years, receiving outpatient treatment, was evaluated and compared with that of a control group composed of 30 healthy subjects with matching ages and genders. Virulence factors, such as exoenzyme production, and susceptibility to five antifungal agents using an E-Test kit were evaluated. C. albicans predominated over other species in the AIDS group, showing a higher production of proteinase and phospholipase when compared with that observed in the control group. In this study few clinical manifestations of and low selectivity for C. albicans (23.3 percent) were observed in the AIDS group. The enzymatic studies showed that 53.8 percent of the AIDS strains were strongly positive whereas only 33.3 percent of the non-AIDS strains were positive. Amphotericin B was the most effective drug among the antifungal agents tested against C. albicans. The frequency, selectivity and level of exoenzyme production by C. albicans suggest a higher pathogenicity in the AIDS children than in the control children

Yeasts from the oral cavity of children with AIDS: exoenzyme production and antifungal resistance.

The oral fungal microbiota of 30 children with AIDS, of both genders, aged from two to six years, receiving outpatient treatment, was evaluated and compared with that of a control group composed of 30 healthy subjects with matching ages and genders. Virulence factors, such as exoenzyme production, and susceptibility to five antifungal agents using an E-Test kit were evaluated. C. albicans predominated over other species in the AIDS group, showing a higher production of proteinase and phospholipase when compared with that observed in the control group. In this study few clinical manifestations of and low selectivity for C. albicans (23.3%) were observed in the AIDS group. The enzymatic studies showed that 53.8% of the AIDS strains were strongly positive whereas only 33.3% of the non-AIDS strains were positive. Amphotericin B was the most effective drug among the antifungal agents tested against C. albicans. The frequency, selectivity and level of exoenzyme production by C. albicans suggest a higher pathogenicity in the AIDS children than in the control children.

In vitro activity of antifungal and antiseptic agents against dermatophyte isolates from patients with tinea pedis

A atividade in vitro de antifúngicos e anti-sépticos foram avaliadas frente a dermatófitos isolados de pacientes com tinea pedis. Os antifúngicos estudados foram: ciclopirox olamine, cetoconazol, tolciclato e terbinafina, e os anti-sépticos foram: iodo povidine (PVPI), própolis, Fungol®, Andriodermol® e ácido bórico. A concentração inibitória mínima (CIM) ou a diluição inibitória mínima (DIM) foi determinada pelo método de diluição em ágar utilizando "yeast nitrogen" base modificado, e a concentração fungicida mínima (CFM) ou diluição fungicida mínima (DFM) foi determinada por subcultura em Saboraud dextrose ágar. Todas as drogas estudadas foram ativas frente aos dermatófitos em concentrações menores do que as utilizadas em produtos e/ou preparações farmacêuticas para uso tópico. Alguns antifúngicos, principalmente a terbinafina e o tolciclato, foram mais eficazes do que outras drogas estudadas, apresentando CIMs e CFMs mais baixos. Concluíu-se que os anti-sépticos representam uma ótima alternativa para tratamento tópico de vários casos de tinea pedis sendo, entretanto, os antifúngicos reservados para formas severas de tinea.

Antifungal susceptibility of oral strains of Candida albicans from AIDS patients / Suscetibilidade de Candida albicans de pacientes com AIDS a diferentes antifúngicos

Foi avaliada a atividade antimicótica in vitro de anfotericina B, ketoconazol e fluconazol contra cepas de Candida albicans coletadas da boca de pacientes com AIDS. A anfotericina B, na concentraçäo igual 16,00 µg/ml e de 2,52 a 16,00 µg/ml. Fluconazol apresentou uma grande variaçäo nas CIMs, que flutuaram de 0,40 a 8,00 µg/ml e sua CFM foi representada por >igual 16,00 µg/ml. Neste estudo näo foi observada resistência à atividade inibitória dos antimicóticos; demonstrou-se, porém, a necessidade de haver novas drogas que apresentem açäo fungicida associada a uma alta viabilidade, mas sem efeitos colaterais importantes

Suscetibilidade a antifúngicos de cepas de Candida albicans isoladas de pacientes com estomatite protética / Susceptibility to antifungal drugs of Candida albicans strains isolated from patients with denture stomatitis

Pacientes portadores de próteses totais, apresentam, com freqüência a chamada estomatite protética, com a qual associa-se Candida albicans determinando a chamada candidíase eritematosa. Assim, procuramos avaliar a sucetibilidade dessa levedura a agentes antifúngicos. A suscetibilidade de dezenove cepas de Candida albicans isoladas de pacientes apresentando estomatite protética foi estudada frente a: um derivado poliênico representado, pela anfotericina B (AnB), e dois derivados azóicos, cetoconazol e miconazol. A atividade antifúngica foi estudada a partir da determinaçäo da concentraçäo inibitória mínima (CIM) e da concentraçäo fungicida mínima (CFM), pela técnica de diluiçäo em ágar. Os resultados obtidos, mostraram baixos valores de CIMs e CFMs (<0,15 µg/ml) para a AnB frente a todas as leveduras. Para o miconazol e o cetoconazol, foram observadas CIMs invariavelmente <4,00 µg/ml; para as CFMs, foram obtidos valores >16,00 µg/ml frente a maioria das cepas. Conclui-se que a AnB apresentou maior açäo fungicida in vitro enquanto os azóis demonstraram açäo fungistática mas näo fungicida. Acreditamos que a pesquisa de novas drogas, principalmente de uso tópico ainda é necessário, a fim de se tratar, com sucesso, a candidíase eritematosa, comumente observada nas chamadas estomatites protéticas

Antifungal susceptibility of Candida albicans isolated from oral mucosa of patients with cancer / Suscetibilidade de Candida albicans a antifúngicos: cepas isoladas da mucosa bucal de pacientes com câncer

O crescente número de infecçöes fúngicas bucais em pacientes imunocomprometidos tem estimulado a pesquisa de drogas mais eficientes. Procuramos, assim, avaliar a suscetibilidade in vitro de cepas de Candida albicans de pacientes com câncer submetidos ou näo a radioterapia frente às seguintes drogas: anfotericina B, cetoconazol, miconazol e itraconazol. A técnica de diluiçäo em ágar YNB e o subcultivo em AS foram respectivamente utilizados para determinaçäo da CIM (Concentraçäo Inibitória Mínima) e da CFM (Concentraçäo Fungicida Mínima). Com esta metodologia, a droga que mostrou melhor atividade antifúngica para cepas de C. albicans isoladas de qualquer dos grupos de pacientes foi a anfotericina B, apresentando baixos valores de CIM em comparaçäo aos azóis, e de CFM. Contudo, é necessário lembrar que o tratamento com antibióticos poliênicos pode causar efeitos tóxicos, mesmo em doses necessárias para se atingir bons resultados com os antifúngicos...

Atividade antifúngica de extratos obtidos de espécies de leguminoseae contra dermatófitos / Antifungal activities of extracts obtained leguminoseae species against dermatophytes

As dermatofitoses são doenças que se localizam na pele, pêlos e unhas, produzidas por fungos dos gêneros Trichophyton, Microsporum e Epidermophyton. O tratamento deste grupo de doenças é feito com os antifúngicos convencionais ou os derivados imidazólicos. No Nordeste do Brasil, as plantas medicinais são frequentemente usadas pela população para o tratamento de doenças infecciosas da pele. Neste trabalho, foi feito a avaliação das propriedades antifúngicas do extrato de plantas usadas na medicinapopular.Extratos de Amburana cearensis, Anadenantheramacrocarpa, Bowdichia virgilioides,Caesalpinia ferrea,Mimosa tenviflora e Pithecelobiumcocliocarpum,contra T.rubrum,T.mentagrophytes,M.canis e E.floccosum,isolados de pacientes portadores de dermatofitoses.A técnica de difusão em agar, processo cavidade-placa, foi usado para testar a atividade antifúngica dos extratos, e incubação foi a 28-30 Graus C durante 10-14 dias. Os extratos estudados mostratam efeitos antifúngicos in vitro até a concentração de 1.250 mg/ml

In vitro interactions between amphotericin B and haloacetamide derivatives against Candida sp

Estudou-se a atividade antifúngica da anfotericina B (AnB) e de derivado haloacetamídico, contra 17 cepas de Candida albicans e 6 de Candida tropicalis. As concentraçöes inibitórias mínimas foram avaliadas a partir de cultivos em ágar "yest nitrogen base", utilizando-se concentraçöes de AnB variáveis de 0,03 ug/ml a 8.0 ug/ml e de etofamida ou de teclosan de 0,25 ug/ml a 64.0 ug/ml. As concetraçöes fungicidas mínimas foram determinadas a partir de subcultivos em ágar Sabourand destrose. Nas concentraçöes estudadas, os derivados haloacetamídicos näo mostraram atividade antifúngica contra as cepas de Candida. Combinaçöes entre a etofamida ou o teclosan com AnB resultaram em interaçöes sinérgicas contra a maioria das cepas, destacando-se a atividade fungicida da combinaçäo AnB-etofamida contra todas as cepas de C. albicans. Esses resultados mostram boas perspectivas para estudos do tratamento de candidose experimental com as drogas combinadas

Micose superficial da regiäo podal em indivíduos considerados imunocomprometidos / Feet superficial mycosis in cases condideredimmunocompromised

FUNDAMENTO - Micoses superficiais das regiöes podais representam as formas mais comuns de doenças fúngicas entre indivíduos sadios. Riscos de aquisiçäo de infecçöes disseminadas graves, por indivíduos imunodeprimidos, säo discutidos, carecendo, no entanto, a literatura, de relatos associados à ocorrência de micoses podais nesse grupo de pacientes. OBJETIVO - Estudo da ocorrência dessas micoses superficiais em transplantados renais, considerando grupo controle e diversos fatores predisponentes à aquisiçäo de micoses superficiais. PACIENTES E MÉTODOS - Por meio de procedimentos clássicos, foram realizados exames micológicos em 155 indivíduos sadios e 83 imunodeprimidos, a partir de amostras de pele e unha. RESULTADOS - Com base em análise estatística, verificou-se probabilidade de ocorrência de fungos em indivíduos com lesöes podais maior para os imunocomprometidos. Para eles, o hábito de uso constante de calçado fechado foi mais significativo na aquisiçäo de micose. Outros hábitos usualmente considerados fatores de risco mostraram correlaçäo para indivíduos sadios. De modo geral, Trichophyton rubrum foi o fungo isolado de maior frequência; Epidermophyton floccosum, diversas espécies de Candida e Trichosporon beigeli foram isolados sobretudo a partir dos imunocomprometidos. CONCLUSÃO - A presença de lesäo e o uso frequente de calçados fechados mostraram-se fatores importantes para aquisiçäo de micoses podais, principalmente por T. rubrum, entre os transplantados renais

Atividade de alguns antimicóticos contra fungos isolados de diferentes classes de pacientes / Some antifungals acrivity against isolated fungi from immunocompromised hosts

Pacientes imunocomprometidos säo considerados de alto risco para aquisiçöes fúngicas graves, disseminadas a partir de processos localizados. Os antifúngicos têm sido administrados de modo empírico e, em vários casos têm sido mostrado ineficazes e altamente tóxicos para o hospedeiro. Entre outros fatores, esses problemas médicos säo agravados pela carência de uma rotineira execuçäo de antibiograma para fungos a fim de subsidiar a clínica na escolha do antimicótico adequado a cada caso. Tais testes tornam-se cada vez mais necessários, em vista da crescente comprovaçäo da falta de resposta aos antifúngicos poliêmicos, azóicos e da griseofulvina contra fungos isolados da regiäo podal de indivíduos considerados sadios e de pacientes imunocomprometidos. A determinaçäo da concentraçäo inibitória mínima (CIM) foi realizada por meio da técnica de diluiçäo em ágar YNB modificado, e a da concentraçäo fungicida mínima (CFM) foi realizada em ASD. Os antifúngicos mostraram-se principalmente inibidores, e raras vezes letais, frente aos fungos isolados. De modo geral, o cetoconazol foi o antifúngico mais ativo e o fluconazol o menos ativo. Os dermatófitos, oriundos de pacientes transplantados foram menos sensíveis a determinadas concentraçöes das drogas. Com base neste trabalho, pode-se ressaltar a importância da execuçäo rotineira de antibiograma para fungos, notadamente para os isolados a partir de imunocomprometidos

Virulence of Candida albicans "clones"

Com base em características morfo-fisiológicas e cromossomais foram selecionados 5 clones oriundos de diferentes cepas de Candida albicans. Por meio de inoculaçöes em camundongos investigou-se a atividade letal de blastósporos e de extratos intra e extracelulares das fases leveduriforme (Y) e micelial (M) dos 5 clones. A inoculaçäo de 5.10(4ª) blastósporos de qualquer dos clones estudados näo foi letal para os animais. Por outro lado, a inoculaçäo de 10(6ª) mostrou que o clone Ca 3.7 foram letais para todos os animais, logo após a inoculaçäo. Entretanto, o extrato extracelular da forma M deste clone näo mostrou toxicidade. A análise dos extratos oriundos do clone Ca 5.5 näo apresentaramtoxicidade. A análise dos extratos dos diferentes clones por SDS-PAGE näo mostrou ocorrência de uma nítida associaçäo entre virulência dos clones e a toxicidade dos extratos. A partir do estudo com macrófagos "in vitro" obteve-se para o clone Ca 5.5 o maior índice de fagocitose. Entretanto, a percentagem de macrófagos com células mortas foi a mesma para os clones Ca 3.7 e Ca 5.5

Recombination of lac- mal+ cells with lac- mal- variants arisen spontaneously from different Candida albicans strains

Cepas de Candida albicans, mantidas em meios de cultura usuais, originaram colônias que em testes de assimilaçäo de fontes de carbono mostraram-se lac+ mal-. Esferosplastos obtidos a partir de células normais, lac- mal+, foram submetidos à fusäo e produziram apenas células lac+ mal+. Após reduçäo na ploidia,essas células deram origem a colônias lac- mal+ (82 por cento), lac- mal (13,3 por cento) e lac+ mal+ (4,4 por cento). Discute-se neste trabalho, ploidia dos produtos de fusäo, ocorrência de heterocariose nesses produtos e a perda de cromossomos durante a segregaçäo

Perfil de DNA cromossômico e sensibilidade à anfotericina B de clones de Candida albicans / Chromosomal DNA profile and susceptibility to amphotericin B of Candida Albicans clones

O perfil de DNA cromossômico e sensibilidade à Anfotericina B foram estudados em cinco clones derivados de diferentes amostras de Candida Albicans.Com base no teste de diluiçäo em ágar, os clones Ca 1.2, Ca 2.4, Ca 3.7 e Ca 5.5 mostraram comportamentos similares frente ao antibiótico.A partir do DNA cromossômico digerido com endonuclease Eco RI, hibridizado com "probe" de DNA A-27, apenas os clones Ca3.7 e o Ca 4.10 mostraram perfis similares.Neste trabalho näo se observou uma clara correlaçäo entre sensibilidade à anfotericina B e perfil de DNA cromossômico.

Candida albicans isoladas de pacientes com SIDA: sensibilidade "in vitro" aos agentes antifúngicos / Candida albicans from AIDS patients: susceptibility \"in vitro\" to antifungal agents

Resumo: Por meio da determinaçäo da CIM(Concentraçäo Inibitória Mínima) e da CFM(Concentraçäo Fungicoda Mínima), os autores verificaram a sensibilidade de candida albicans isoladas de pacientes com SIDA, frente a Anfotericina B, Nistatina, Cetoconazol e miconazol.Os autores näo verificaram a ocorrência de amostras resistente e discutem o fenômeno da resistência de C.albicans aos antifúngicos poliênicos e imidazólicos.

Aspectos morfo-fisiológicos, fatores de virulência e sensibilidade a antifungos de amostras de candida albicans, sorotipos A e B, isoladas em Säo Paulo, Brasil / Morphology, physiology, virulence factors and susceptibility to antifungal drugs of candida albicans isolated in Säo Paulo, Brazil

Resumo: Trinta amostras de C. albicans, 15 sorotipos A e 15 A, isoladas de diferentes materiais clínicos (Säo PAulo, Brasil), foram estudadas quanto aos aspectos morfológicos, fisiológicos, fatores de virulência in vitro (produçäo de proteinases e fosfolipases) e in vitro (inoculaçäo experimental em coelhos) e sensibilidade a drogas antifúngicas (Anfoterinal, Miconazol, Cetoconazol), A produçäo de proteinases em relaçäo ao tempo de isolamento das amostras, a correlaçäo entre produçäo de proteinases, e fosfolipases e a sensibilidade aos antifúngicos foram os resultados significantes (au)

Atividade de anti-sépticos contra leveduras isoladas da cavidade oral de pacientes com cancer de boca antes e durante a radioterapia / Antiseptics activity against yeasts isolated of the oral cavity from patients with mouth neoplasm before and during radiotherapy

Foi estudada, "in vitro", a atividade antifúngica de cinco anti-sépticos contra leveduras isoladas antes e durante a radioterapia de pacientes de carcinoma epidermóide de boca. A concentraçäo inibitória mínima do triclosan variou de < ou = 0,07 g/L a 20 > g/L, conforme a cepa estudada, enquanto que a dos outros anti-sépticos foi invariavelemente < ou = 0,07 g/L. O hexaclorofeno e o timerosal foram fungicidas também em concentraçöes < ou = 0,7 g/L para todas as leveduras avaliadas, e o cloreto de cetilpiridino o foi a 0;31 g/L. Em concentraçöes de até 20g/L, o triclosan näo demonstrou atividade fungicida contra a maior parte das leveduras, e a violeta de genciana näo foi letal somente para duas cepas de C. albicans isoladas de pacientes que se encontravam sob radioterapia

Atividade de derivados imidazólicos contra espécies de candida isoladas de pacientes com câncer / Imidazole antibiotics activities against Candida species recovered from cancer patients

Foram avaliadas as atividades fungicida e fungistática de quatro derivados imidazólicos contra espécies de Candida, isoladas de pacientes com câncer e submetidos à quimioterapia ou à radioterapia. Embora a atividade antifúngica desses antibióticos tenha variado conforme a espécie estudada, a µg/ml o cetoconazol foi agente inibidor mais efetivo, agindo sobre 90,3 (por cento) das leveduras, enquanto o clotrimazol foi o menos efetivo, agindo sobre 26,4 (por cento). O nitrato de econazol e o nitrato de miconazol foram fungistáticos para, praticamente, a mesma percentagem de leveduras (63,8 e 63,4 (por cento) respectivamente), porém, assim como os outros imidazóicos, foram icapazes de exercer açäo fungicida contra a maioria delas (au)